מסדר יוחנן הקדוש, הוא מסדר ההוספיטאלרים. מקורו במלה בית מחסה, "הוספיטל" בלאטינית. המסדר הוקם בתחילת המאה ה-12 לצורך הגשת עזרה רפואית לצליינים נוצרים שביקשו לעלות לרגל לירושלים.
חברי המסדר נחלקו לשלושה: צוותים הומאניטריים של המשרתים בבית החולים והמסייעים לצליינים; אנשים שעסקו בפעילות דתית ונזירות שנוספו מאוחר יותר; אנשי צבא. חלק מאנשי המסדר הקפידו לקיים אורח חיים נזירי, שכלל לבוש פשוט, תפילות רבות במשך היום וארוחות משותפות. חלק אחר של אנשי המסדר, רובו חילוני, מילא תיפקודים צבאיים, וקיים הירארכייה ברורה של מעמדות ותפקידים: מאות אבירים, אלפי אנשים בחיל-רגלים ועוד שכירי חרב.
בהדרגה, ולאורך עשרות שנים, אנשי המסדר רכשו בעכו מבנים, בורות מים וזכויות בנכסים נוספים. כך גדל הרובע ההוספיטאלרי, והשתרע בשיאו על כ- 27 דונם בצמוד לחומה הצפונית של העיר. המתחם החשוב ביותר היה הקסטרום – המצודה הגדולה שנבנתה בצפון הרובע וכללה ארבעה אגפים סביב חצר. ראה מפת המתחם.
מדרום לקסטרום היו מבנה בית החולים והאכסנייה, לרבות בית מרחץ, ובחלק הדרומי ביותר של הרובע (באתרו של מסגד אל-זייתונה כיום) שכנו הכנסייה והמנזר.